具體判斷步驟與實操要點
1. ?檢查標準曲線?
使用Excel繪制標準品濃度（橫坐標）與OD值（縱坐標）的散點圖，并擬合?四參數(shù)邏輯曲線（4PL）或線性回歸曲線?。
觀察曲線是否呈典型“S"型或良好線性，高濃度點無下墜（排除鉤狀效應）。
計算R2值，?≥0.99為優(yōu)秀?，0.98–0.99可接受，低于0.95則判定失敗。
示例：若6號標準品（濃度）OD值異常偏低，提示可能存在“鉤狀效應"，需將樣本進一步稀釋重測。
2. ?評估空白孔（Blank Control）?
空白孔應無顯色或極淺黃色，OD值?必須低于0.1?。
若OD > 0.1，可能原因包括：
試劑污染（如酶標抗體被激活）
洗滌，殘留酶標物
顯色時間過長或未避光操作
3. ?驗證樣本結(jié)果合理性?
檢查樣本濃度是否在試劑盒檢測范圍內(nèi)（如15.625–1000 pg/mL）。
若所有樣本OD值接近空白孔，可能原因：
樣本中PI3K含量極低（真實陰性）
樣本處理不當導致蛋白降解
使用了含?NaN?的樣本或緩沖液?，抑制了HRP酶活性
若所有樣本OD值過高“壓線"，應稀釋后重測。
4. ?復孔一致性檢查?
對每個樣本的3個復孔OD值進行計算，CV < 10%為佳。
若某樣本CV > 15%，應剔除離群值或重新檢測。
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